Методы окрашивания бактерий

МУНИЦИПАЛЬНОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

ДОПОЛНИТЕЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ДЕТСКИЙ ТЕХНОПАРК «кВАНТОРИУМ»

Разработка учебного занятия

по дополнительной общеобразовательной общеразвивающей

программе «Мир микроскопии»

1 год обучения (7-11 лет)

Блок № 6: Микробиология.

Тема № 6.3: Методы окрашивания бактерий.

Автор-составитель:

Овчинникова Людмила Павловна

педагог дополнительного образования

МБОУ ДО Кванториум

г. Комсомольск-на-Амуре

2020 г.

Цель: Формировать основное представление об окрасках бактериальной клетки.

Задачи:

1). Образовательные:

Сформировать основное представление об окраске бактериальной клетки;

Сформировать основное представление о функциях окраски;

Расширить представление учащихся о значении бактерий в природе и жизни человека.

2). Развивающие:

Развивать умение грамотно выражать мысли, речь учащихся и логическое мышление;

Развивать умение работать в команде, сотрудничать друг с другом;

Развивать умения анализировать, выделять главное, и объективно оценивать окружающую действительность.

3).Воспитательные:

Воспитывать бережное отношения к окружающему нас миру.

Воспитывать доброжелательное отношение учащихся друг к другу, обеспечивать доброжелательное отношение к учащимся со стороны

Воспитывать экологическое мышление, гуманистическое мышление, терпимое отношение к чужим взглядам, позиции, образу жизни.

Тип занятия: комбинированное.

Основные понятия: бактерии, окраска.

Оборудование и материалы: Презентация «Методы окрашивания бактерий», интерактивная доска, проектор.

Ход занятия:

Организационный момент (3-5 мин.).

Актуализация знаний (7-10 мин.).

Объяснение нового материала (40-45 мин.).

Динамические паузы (4-5 мин.)

Закрепление материала (15-20 мин.)

Рефлексия. Подведение итогов (5 мин.)

Организационный момент.

Педагог: Здравствуйте, ребята. Я рада вас видеть. Желаю вам, чтобы наше занятие принесло вам только положительные эмоции.

Актуализация знаний.

Перед тем как перейти непосредственно к теме занятия, я хочу, чтоб вы вспомнили, что мы делали на прошлом занятии.

Учащиеся: Мы делали посев бактерий на питательную среду агар-агар.

Педагог: Правильно. А что нам надо чтоб рассмотреть бактерии?

Учащиеся: Надо выполнить окраску бактерий.

Объяснение нового материала.

Педагог: Совершенно верно! А теперь, давайте узнаем, что же это такое и зачем это надо.

Процесс идентификации микроорганизмов предполагает выявление нескольких групп признаков, среди которых морфологические признаки представляют особый интерес, так как именно эти свойства бактерий положены в основу первичной дифференциации микробов по определителю Берджи. Среди основных морфологических признаков следует назвать следующие:

форму клеток,

размеры клеток,

взаимное расположение клеток после деления,

способность окрашиваться методом Грама,

способность к образованию эндоспор,

способность образовывать капсулы,

способность накапливать различные соединения в составе клетки,

способность к активному движению с помощью жгутиков

и некоторые другие.

Изучение морфологии и строения микроорганизмов, величина которых измеряется в большинстве случаев микрометрами (1 мкм = 0, 001 мм), возможно только с помощью микроскопов. Различные методы микроскопирования позволяют с наибольшим успехом выявлять разные характеристики микробов. Световые микроскопы предназначены для изучения микроорганизмов размером не менее 0,2 мкм, электронные – для изучения более мелких объектов (структуры микроорганизмов и тканей). В медико-биологических исследованиях, помимо световой микроскопии, применяются фазово-контрастная, интерференционная, люминесцентная, поляризационная, стереоскопическая, инфракрасная микроскопия и др.

Бактериоскопический метод исследования предусматривает изучение микроорганизмов в живом или фиксированном и окрашенном состоянии. Для изучения микроорганизмов в живом состоянии используют метод раздавленной капли и метод висячей капли. Наиболее часто применяют микроскопию бактерий в фиксированном и окрашенном состоянии. Для приготовления фиксированного и окрашенного препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок диаметром около 1-1,5 см. Если исследуют жидкий материал, то его непосредственно петлей наносят на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе. Для фиксации используют физические и химические методы. Для фиксации мазка физическим методом предметное стекло медленно проводят 3 раза через пламя горелки.

При простом методе фиксированный мазок окрашивают каким-либо одним красителем, например, водным раствором фуксина (1-2 минуты) или метиленовым синим (3-5 минут), промывают водой, высушивают и микроскопируют. Сложные методы окрашивания включают использование нескольких красителей. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других.

В 1884 году датский микробиолог Ганс Христиан Грам предложил метод окраски бактерий с использованием генцианвиолета, йода, этилового спирта и фуксина. Все бактерии в зависимости от окраски по Грамму подразделяют на 2 группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.

Динамическая пауза

«Делай так» - https://www.youtube.com/watch?v=WHsuZgtaEPs&t=48s

Педагог:Давайте приступим к практической работе.

Перед вами технологические карты (Приложение 1).

Для начала вспомним технику безопасности при работе с микроскопом.

Правила работы с микроскопом.

1. Микроскоп поставьте штативом к себе на расстоянии 5-10 см от края стола. Приведите микроскоп в рабочее положение, наклонив верхнюю часть штатива на 45 градусов. В отверстие предметного столика при помощи зеркала направьте свет.
2. Приготовленный препарат поместите на предметный столик и закрепите предметное стекло зажимами.
3. Пользуясь винтом, плавно опустите тубус так, чтобы нижний край объектива оказался на расстоянии 1-2 мм от препарата.
4. В окуляр смотрите одним глазом, не закрывая и не зажмуривая другой. Глядя в окуляр, при помощи винтов медленно поднимайте тубус, пока не появится чёткое изображение объекта исследования.
5. После работы при помощи винтов поднимите тубус. Проверьте, чтобы в отверстие предметного столика был направлен объектив с самым маленьким увеличением. Снимите препарат с предметного столика. Микроскоп приведите в нерабочее положение.
Микроскоп - хрупкий и дорогой прибор: работать с ним надо аккуратно, строго следуя правилам.

Техника безопасности при работе с микроскопом.

1. При изучении препаратов под микроскопом необходимо снимать очки.

2. Не делать резких поворотов головой вблизи тубуса микроскопа, чтобы не повредить глаза, лицо.

3. Чтобы не травмировать пальцы, предметные стекла брать за торцовую часть (ребро).

4. Чтобы не раздавить предметное стекло, объектив следует опускать под контролем зрения.

5. Не использовать зеркало для наведения «солнечных зайчиков», а после работы зеркало поворачивать так, чтобы в нем не отражалось солнце.

6. Переносить микроскоп надо так, чтобы одна рука снизу поддерживала ножку, а другая удерживала тубусодержатель.

Работу проводим в перчатках.

Техника выполнения работы.

Предметное стекло перед исследованием обезжиривают спиртом.

Берем микробиологическую петлю и делаем мазок исследуемых культур.

Препарат высушивают на воздухе.

На мазок кладут полоску фильтровальной бумаги.

На мазок наносят 2-3 капли карболового раствора генциана фиолетового (пробирка 1).

Выдерживаем в течение 2 мин.

Удаляем фильтровальную бумагу;

Наносим 2-3 капли раствора Люголя (пробирка 2).

Выдерживаем в течение 1 мин.

Сливаем остатки красителя и раствора Люголя.

Обесцвечиваем в течение 30-45 сек 95% этиловым спиртом.

Промываем дистиллированной водой.

Наносим 2-3 капли водного раствора фуксина (пробирка 3).

Выдерживаем в течение 2 мин.

Сливаем краситель.

промываем препарат дистиллированной водой.

Высушиваем на воздухе.

Микроскопируем.

Сущность механизма окраски по Граму заключается в следующем: вначале препарат окрашивают генциан-фиолетовым, а затем раствором Люголя, в результате чего образуется комплекс генциан-фиолетовый + йод, и все клетки окра­шиваются в фиолетовый цвет. Последующая обработка спиртом дифференцирует два типа бактерий. У грамположительных бактерий образовавшийся комплекс не вымывается спиртом, что обусловлено прочной связью с тейхоевыми кислотами, плотностью и многослойностью пептидогликана и при докрашивании фуксином Пфейффера они сохраняют фиолетовую окраску. У грамотрицательных бактерий, комплекс генциан-фиолетовый + йод вымывается спиртом, т.к. нет тейхоевых кислот и тонкий слой пептидогликана, поэтому обесцвеченные микробные клетки при бкраске фуксином Пфейффера приобретают красный цвет.

Закрепление материала:

Обучающиеся работают в группах и выполняют интерактивные задания «Составление схемы строения бактериальной клетки», «Формы бактериальных клеток».

Рефлексия. Подведение итогов.

Педагог: Подходит к концу наше занятие. Скажите, ребята, что нового для себя вы узнали, с чем познакомились? А что у вас вызвало затруднение и в чём?

Теперь давайте составим синквейн. Это японское слово, которое означает в буквальном переводе «эмоциональное отношение». Синквейн будет состоять из 5 строк.

Одним словом (именем существительным) выразите тему сегодняшнего занятия

Подберите к этому слову 2 прилагательных

Подберите к этому слову 3 глагола

Составьте фразу, в которой будет отражена значимость этого слова

Подберите синоним к этому слову.

Пример составленного синквейна.

Фотосинтез.

Последовательный, уникальный

Образует, превращает

Сложный многоступенчатый процесс

Жизнь (энергия).

Вы молодцы. Спасибо за занятие.

Список использованной литературы

Аникеев В.В. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / В.В. Аникеев, К.А. Лукомская. – Москва : Просвещение, 1983. – 128 с.

Асонов Н.Р. Микробиология / Н.Р. Асонов. – Москва : ВО Агропромиздат, 1989. – 230 с.

Калганова Т.Н. Практикум по микробиологии и биотехнологии: лабораторные работы / Т.Н. Калганова. – Южно-Сахалинск : СахГУ, 2011. – 56 с.

Микроорганизмы: вирусы, бактерии, грибы : учеб. пособие. – Санкт-Петербург : изд-во «ЭЛБИ-СПб», 2003. – 147 с.

Нетрусов А.И. Общая микробиология : учебник для студ. высш. учеб. заведений / А.И. Нетрусов, И.Б. Котова. – Москва : Академия, 2007. – 220 с.

Речкин А.И., Копылова Г.Е., Кравченко Г.А. МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ И МЕТОДЫ ИХ ВЫЯВЛЕНИЯ: Учебно-методическое пособие / А.И. Речкин. – Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2015 – 34 с.

Сайт ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Отдел новых технологий - https://www.dntpasteur.ru/i7-50101/

Приложение 1.

Технологическая карта

«Метод окраски бактерий по Граму»

Адрес публикации: https://www.prodlenka.org/metodicheskie-razrabotki/394441-metody-okrashivanija-bakterij